RP-HPLC에서 이동상의 조성과 Buffer의 농도에 따른 체류인자의 예측

초록

분석기기용으로 널리 이용되는 크로마토그래피가 상업적 규모로 응용되려는 시도는 오래 전부터 있어 왔으나 유전 및 생명공학에 의한 제품들에 대한 분리, 정제의 방법으로서 연구 및 산업화가 급속히 진행중이다. 최근에 크로마토그래피는 천연물, 세포배양, 또는 합성 후에 고부가가치의 특정성분을 고순도로 분리하기 위해서 주로 이용된다. RNA를 포함하는 수용액을 5'-phosphodiesterase enzyme 과 같이 배양을 하면 네 가지 5'-nucleotides인 5'-Guanosine monophosphate(5'-GMP), 5'-Uridine monophosphate(5'-UMP), 5'-Cytidine monophosphate(5'-CMP), 5'-Adenosine monophosphate(5'-AMP) 가 형성된다. 이중에서 5'-GMP만이 향미제로 쓰이고 있다. 또한 5'-AMP는 향미제로 쓰이는 5'-Inosine monophosphate(5'-IMP), 의 전구체로 쓰이고 있다. 역상 고성능 액체크로마토그래피 (RP-HPLC)는 최근에 가장 많이 쓰이는 분석 기기로써, 이온성 물질을 분리하고 분석하기 위해 일반적인 이동상에 염(salt), 산, 염기와 같은 이온성 물질을 첨가하여 분리하는 기술(Ion-pair liquid chromatography)이 도입되고 있다. 이온성 물질은 물에서 이온으로 존재한다. 이 이온들은 강한 극성을 가지고 있기 때문에 C18기를 가지고 있는 비극성 고정상에는 체류하지 않기 때문에 분리하기가 어렵다. 이러한 이온성 물질을 RP-HPLC에서 분리하기 위해서는 분리하는 물질보다 이온세기가 큰 물질을 이동상에 첨가하여 분리하고자 하는 물질의 이온화 경향을 줄여 이온화되지 않은 물질을 고정상에 체류하게 하여 체류시간을 증가시켜 분리한다. 본 연구의 목적은 이동상의 조성과 buffer의 농도에 따라 체류인자를 예측하여 최적 분리조건을 얻는 것이다.