고충 칼슘소체에서 추출한 단백질 분획

초록

칼슘소체는 조충의 특징적인 구조물로 아직 그 기능이 명확하게 밝혀져 있지 않다. 일부 연구자들에 의해 분리된 칼슘소체에 단백질 성분이 함유되어 있고, 충체 단백질과의 반응을 통해 단백질이 결합될 수 있음이 확인되기는 하였으나 칼슘소체 자체에 원래 결합되어 있는 단백질 분획은 확인된 바 없다. 본 연구에서는 순수하게 분리된 칼슘소체에서 단백질을 추출하고 이를 확인하기 위하여 시행되었다. 국내산 꽃뱀에서 분리된 고충의 충체를 균질화한 후 원심분리하여 상청액은 제거하고 남은 침전물에서 칼슘소체를 순수하게 분리하였다. 분리된 칼슘소체를 2배 부피의 0.1 M sulfamic acid 용액을 가하고 1분간 진탕한 다음 15,000 rpm에서 10분간 원침시킨 후 상청액을 모으는 과정을 칼슘소체가 완전히 용해될 때까지 반복하였다. 분리된 상청액들은 7.5-15% SDS-PAGE를 시행하고 젤을 은염색(silver stain)하여 단백질 분획의 존재 여부를 확인하였다. 용해 과정 중인 칼슘소체의 일부를 광학현미경으로 관찰한 결과 칼슘소체가 작은 입자로 용해되고 있음을 확인할 수 있었다. 모두 19번의 0.1 M sulfamic acid 용해 과정을 통해 칼슘소체가 완전히 용해되었다. 획득한 상청액들을 전기영동하고 은염색을 시행한 결과 가장 마지막 19번째 상청액에만 단백질이 농축되어 있음을 확인할 수 있었다. 염색된 젤 상에서 56, 53, 46, 40, 35, 29, 28, 24.5, 21, 19, 16, 13, 10, 8 kDa 등의 주요 단백질 분획을 포함하여 20개의 단백질 분획을 확인할 수 있었다. 이중 21, 16 kDa의 두 분획은 특징적으로 강하게 염색되는 것을 확인할 수 있었다. 이상의 결과로 고충의 칼슘소체에서 단백질을 추출하여 확인할 수 있었으며 앞으로 이들의 기능과 충체 단백질과의 관계에 대한 연구가 추가로 수행되어야 할 것으로 사료된다.