인간 유래 관절 연골세포의 primary culture를 위한 무혈청 배지의 개발

초록

목적: 본 연구에서는 인간 유래 관절 연골세포를 primary culture로부터 배양할 수 있는 무혈청 배지의 개발을 목표로 하였으며 동시에 연골세포의 특성을 오래 유지할 수 있는 배양법을 개발하고자 하였다. 방법: 이를 위해 10% FBS를 첨가한 배지를 대조군으로 하여 무혈청 배지에서 연골세포를 단층 배양 하였다. 연골세포의 증식과 세포외기질 합성 정도를 비교하기 위하여 flow-cytometric analysis, Western blot, RT-PCR, DMB (dimethylmethylene blue) assay 그리고 histochemical staining을 실시하였다. 결론: 10% FBS 첨가 배지 대비 무혈청 배지에서 세포 성장은 평균 94% 증식을 보였으며, 연골세포의 세포외기질 중의 하나인 glycosaminoglycan(GAG)은 최고 65% 합성되었다. 연골세포의 primary culture 시 세포의 부착성 증대를 위해 기질성분을 코팅한 dishes의 사용과 배지를 반만 교환해 줌으로써 얻는 conditioned medium의 효과를 통하여 단층 배양에서 collagen type II (Col. II) 합성이 보다 오래 유지되었다. 더욱이 무혈청 배지에서 alginate bead 배양을 한 결과 Col. II mRNA 양은 단층 배양한 것과 비슷하였으며 aggrecan mRNA 양은 단층 배양에서 더 많이 합성되었다. 또한 조직 염색을 통한 분석에서도 무혈청 배지에서 배양한 연골세포와 유사한 결과를 얻을 수 있었다.